Piattaforma Nazionale di Microscopia Ottica

La microscopia wide-field include diverse tecniche che consentono di acquisire immagini di un campione in epifluorescenza, campo chiaro e scuro, DIC e contrasto di fase.

Microscopi wide-field disponibili:

• Leica Thunder Imager Live Cell
  Microscopio wide-field rovesciato e motorizzato con clearing digitale. Illuminatore per epifluorescenza con 8 LED singoli (395 nm, 438 nm, 475 nm, 551 nm, 555 nm, 575 nm, 635 nm and 730 nm) e camera monocromatica sCMOS.
• Zeiss Axioscope5
  Microscopio wide-field manuale dritto con illuminatore per epifluorescenza LED e camera monocromatica sCMOS..
• Zeiss Axiozoom V16 con modulo apotome
  Microscopio binoculare con tavolo e messa a fuoco motorizzati per acquisizione di grandi campi di vista, camera monocromatica sCMOS retroilluminata e modulo Apotome.

Mediante l’uso di un pinhole, la microscopia confocale consente di migliorare il sezionamento ottico rispetto alla microscopia wide-field, rendendo possibile la ricostruzione tridimensionale dei campioni.

Microscopi confocali disponibili:

• Zeiss LSM980
  Microscopio confocale a scansione con Airyscan2, 5 linee laser di eccitazione (405 nm, 488 nm, 561 nm, 594 nm e 639 nm), sample finder, illuminatore per epifluorescenza e camera sCMOS monocromatica.
• Zeiss LSM980-NLO
  Microscopio confocale a scansione con Airyscan2, 5 linee laser di eccitazione (405 nm, 488 nm, 561 nm, 594 nm, e 639 nm), eccitazione multifotone mediante un laser Ti:Sa tunable (700 nm – 1300 nm) ed una linea fissa (1040 nm), 6 detector non-descansiti (4 PMT e 2 BiG), illuminatore per epifluorescenza ecamera sCMOS monocromatica.
• Nikon Ti2 con testa di scansione spinning-disk CREST v3
  Confocale spinning-disk con 7 linee laser di eccitazione (405 nm,  446 nm, 477 nm, 520 nm, 547 nm, 638 nm e 749 nm), 4 laser ad alta potenza per FRAP e TIRF (405 nm, 488 nm, 520 nm e 640 nm), 4 camere sCMOS monocromatiche retroilluminate ad alta sensibilità grande campo di vista.
• Leica Stellaris 8 per in vivo imaging
  Microscopio confocale a scansione dotato di laser bianco (fino ad 8 linee laser simultanee tra 440 nm e 790nm), laser 405 nm, dicroico regolabile AOBS, dual scanner (convenzionale e risonante) e modulo FLIM integrato.

La microscopia a super-risoluzione consente di raggiungere risoluzioni spaziali superiori al limite di diffrazione.

Microscopi a super-risoluzione disponibili:

• Zeiss Elyra7
  Microscopio ad illuminazione strutturata e per localizzazione di singola molecola con 4 linee laser di eccitazione (405 nm, 488 nm, 561 nm e 638 nm), due camere sCMOS monocromatiche, modulo TIRF, PALM e STORM.
• Abberrior FacilityLine
  Microscopio STED con 5 linee laser di eccitazione (405 nm, 485 nm, 561 nm e 640 nm), una linea laser di deplezione (755 nm), ottiche adattive, MATRIX detectors e modulo FLIM.
• Leica Stellaris 8 per imaging a super-risoluzione
  Microscopio confocale a scansione con modulo STED e tandem scanners (convenzionali e risonanti), laser bianco (fino ad 8 linee laser simultanee tra 440 nm e 790nm), laser 405 nm, dicroico regolabile AOBS, dual scanner (convenzionale e risonante) e modulo FLIM integrato.

Mediante l’utilizzo di un obiettivo di illuminazione separato, la microscopia lightsheet minimizza la fototossicità ed il fotobleaching illuminando selettivamente il solo piano focale che si sta acquisendo.

Microscopi lightsheet disponibili:

• Zeiss Lattice Lightsheet 7
  Microscopio lightsheet con 3 linee laser di eccitazione (488 nm, 561 nm e 640 nm) e due camera sCMOS monocromatiche.

Uno slide scanner consente l’imaging automatizzato di grandi quantità di vetrini

• Zeiss Axio Scan.Z1 automated slide scanner
  Slide scanner automatico con fotocamera a colori e monocromatica, illuminatore per epifluorescenza con 7 LED (385 nm, 430 nm, 475 nm, 555 nm, 590 nm, 630 nm e 735 nm), 6 obiettivi (2.5x/0.12, 5x/025, 10x/0.45, 20x/0.45, 20x/0.8, and 40x/0.95).

Servizio completo di sorting di popolazioni cellular rare da campioni eterogenei, clonaggio cellulare (deposizione di singole cellule in pozzetti multi-well), arricchimento di particelle e sorting ad alta purezza di grandi volumi cellulari.

• Sorting di single cellule per sequencing.
• Sorting di diversi tipi cellulari, incluso cellule immunitarie e cellule staminali ematopoietiche, cellule staminali mesenchimali, cellule produttrici di citochine ed sorting cellulare per line di cellule e cellule transfettate.

Dettagli tecnici dei sorter cellulari:

• BD FACSDiscover S8
  Questo strumento è il più tecnologicamente avanzato e mette a disposizione degli utenti la possibilità di combinare la separazione cellulare con l’imaging ed un’analisi spettrale multiparametrica. Sorting simultaneo fino a 6 popolazioni cellulari, con recupero in vari contenitori, incluso piastre multiwell da 384 pozzetti. Il sorter ha 5 linee laser (349 nm, 405 nm, 488 nm, 561 nm e 637 nm).
• MoFlo Astrios EQ
  Mediante il dual forward scattering, questo sorter è in grado di rilevare particelle di piccole dimensioni quali MV e può effettuare bulk sorting a velocità molto elevate. Sorting simultaneo fino a 6 popolazioni cellulari con recupero in vari contenitori, incluso piastre multiwell da 1536 pozzetti. Il sorter ha 6 linee laser (355 nm, 405 nm, 488 nm, 561 nm, 592 nm e 640 nm).

Analisi di popolazioni cellulari in sospensione utilizzando analizzatori convenzionali, spettrali e/o in combinazione con imaging.

Caratteristiche tecniche degli analizzatori:

• Cytek Aurora Spectral Analyzer
  Questo analizzatore è progettato per applicazioni complesse ed è compatibile con l’utilizzo di una vasta gamma di combinazioni di fluorocromi. Permette la separazione spettrale di combinazioni di marcatori difficili da discriminare e di estrarre il segnale di autofluorescenza per migliorare la rilevazione di marcatori deboli. L’analizzatore ha 5 linee lasers (355 nm, 405 nm, 488 nm, 561 nm e 640 nm), una rilevazione spettrale a 64 canali ed un campionatore automatico per piastre e/o provette.
• ImageStream Mark II Imaging Flow Cytometer: Il sistema ImageStream Mk II combina le prestazioni ad alta produttività della citometria a flusso con le immagini e gli approfondimenti funzionali della microscopia. Questa combinazione unica consente un’ampia gamma di applicazioni che sarebbero impossibili utilizzando una sola delle due tecniche. L’analizzatore ha 6 linee lasers (375 nm, 405 nm, 488 nm, 561 nm, 592 nm e 642 nm) ed un laser a 785 nm per scattering laterale, un detector spettrale a 12 canali ed un sistema multicanale per microscopia in fluorescenza, campo chiaro e scuro (dark field) e ingrandimenti a 20X, 40X e 60X.
• CytoFLEX LX Flow Cytometer
  Lo strumento consente di effettuare analisi multi-parametriche ad alta velocità per immunofenotipizzazione a analisi di microvescicole mediante 6 linee laser e 21 sensorei APD per la fluorescenza. Le linee laser disponibili emettono a 355 nm, 405 nm, 488 nm, 561 nm, 640 nm e 808 nm. Il recupero dei campioni può essere effettuato in singole provette o in piastre multiwell da 96 pozzetti (con fondo piatto, con profilo a V od a U). È possible utilizzare anche piastre profonde per campioni che richiedono grandi volumi. Oltre ai parametri di scattering laterale standard utilizzando una linea laser a 488 nm, lo strumento è anche configurato per utilizzare una linea laser aggiuntiva a 405 nm.

• Servizio di consulenza: Preparazione dei Campioni/Design del Panel/Analisi dei Dati
  La consultazione dell’utente è un primo passo essenziale per garantire dati di alta qualità. Il nostro staff è a disposizione per guidare gli utenti nuovi e attuali per soddisfare le esigenze di ogni progetto, affrontando tutte le fasi critiche tra la concezione dell’esperimento di citometria a flusso, le fasi appropriate per la preparazione del campione compresi i controlli sperimentali richiesti, l’acquisizione dei campioni e l’analisi dei dati generati.

La consultazione dell’utente è un primo passo essenziale per garantire dati di alta qualità. Il nostro staff è a disposizione per guidare gli utenti nuovi e attuali per soddisfare le esigenze di ogni progetto, affrontando tutte le fasi critiche tra la concezione dell’esperimento di citometria a flusso, le fasi appropriate per la preparazione del campione compresi i controlli sperimentali richiesti, l’acquisizione dei campioni e l’analisi dei dati generati.

Le matrici MEA misurano l’attività elettrica di un network di cellule in tempo reale e senza bisogno di marcatori.

• 3BRAIN AG BioCAM DupleX
  Sistema MEA per imaging funzionale in vitro, compatible con chip MEA a 4096 elettrodi. Il sistema è utilizzabile con cellule aderenti, sezioni di tessuto e di organoidi e consente di misurare le oscillazioni di potenziale elettrico extracellulari.

Utilizzando un marcatore fluorescente sensibile alla concentrazione di ioni, è possibile analizzare l’attività elettrica intracellulare mediante un microscopio a fluorescenza convenzionale. Questo servizio verrà effettuato utilizzando I microscopi offerti dalla IU1.